Osteoartriti (OA) është një nga sëmundjet afatgjata kronike degjenerative të kyçeve të kockave që prek popullatën e moshuar mbi 65 vjeç.
1]. Në përgjithësi, pacientët me OA diagnostikohen me kërc të dëmtuar, sinovium të përflakur dhe kondrocite të gërryer, të cilat shkaktojnë dhimbje dhe shqetësime fizike.
2]. Dhimbja e artritit shkaktohet kryesisht nga degjenerimi i kërcit në nyje nga inflamacioni, dhe kur kërci dëmtohet rëndë kockat mund të përplasen me njëra-tjetrën duke shkaktuar dhimbje të padurueshme dhe vështirësi fizike.
3]. Përfshirja e ndërmjetësve inflamatorë me simptoma të tilla si dhimbja, ënjtja dhe ngurtësimi i kyçit është i dokumentuar mirë. Në pacientët me OA, citokinat inflamatore, të cilat shkaktojnë erozionin e kërcit dhe kockës subkondrale, gjenden në lëngun sinovial.
4]. Dy ankesat kryesore që kanë në përgjithësi pacientët me OA janë dhimbja dhe inflamacioni sinovial. Prandaj, qëllimet kryesore të terapive aktuale të OA janë të ulin dhimbjen dhe inflamacionin. [
5]. Megjithëse trajtimet e disponueshme të OA, duke përfshirë barnat jo-steroide dhe steroide, kanë efikasitet të dëshmuar në zbutjen e dhimbjes dhe inflamacionit, përdorimet afatgjatë të këtyre barnave kanë pasoja të rënda shëndetësore si mosfunksionime kardiovaskulare, gastro-intestinale dhe renale.
6]. Kështu, një ilaç më efektiv me më pak efekte anësore duhet të zhvillohet për trajtimin e osteoartritit.
Produktet natyrore shëndetësore po bëhen gjithnjë e më popullore për të qenë të sigurta dhe lehtësisht të disponueshme [
7]. Ilaçet tradicionale koreane kanë dëshmuar efikasitet kundër disa sëmundjeve inflamatore, duke përfshirë artritin.
8]. Aucklandia lappa DC. është i njohur për vetitë e tij medicinale, të tilla si rritja e qarkullimit të qi për lehtësimin e dhimbjeve dhe qetësimin e stomakut, dhe është përdorur tradicionalisht si një analgjezik natyral [
9]. Raportet e mëparshme sugjerojnë se A. lappa posedon anti-inflamator [
10,
11], analgjezik [
12], antikancerogjene [
13] dhe gastroprotektive [
14] efektet. Aktivitetet e ndryshme biologjike të A. lappa shkaktohen nga përbërësit kryesorë aktivë të tij: costunolide, dehydrocostus lactone, dihydrocostunolide, costuslactone, α-costol, saussurea lactone dhe costuslactone [
15]. Studimet e mëparshme pohojnë se kostunolidi tregoi veti anti-inflamatore në lipopolisakaridet (LPS), të cilat induktuan makrofagët përmes rregullimit të NF-kB dhe rrugës së proteinës së goditjes nga nxehtësia.
16,
17]. Megjithatë, asnjë studim nuk ka hetuar aktivitetet e mundshme të A. lappa për trajtimin e OA. Hulumtimi aktual ka hetuar efektet terapeutike të A. lappa kundër OA duke përdorur (monosodium-jodoacetate) MIA dhe modelet e brejtësve të induktuar nga acidi acetik.
Monosodium-jodoacetati (MIA) përdoret në mënyrë të famshme për të prodhuar shumë nga sjelljet e dhimbjes dhe tiparet patofiziologjike të OA në kafshë.
18,
19,
20]. Kur injektohet në nyjet e gjurit, MIA prish metabolizmin e kondrociteve dhe shkakton inflamacion dhe simptoma inflamatore, të tilla si kërci dhe erozioni i kockave subkondrale, simptomat kryesore të OA.
18]. Përgjigja e shtrëngimit të shkaktuar nga acidi acetik konsiderohet gjerësisht si simulimi i dhimbjes periferike te kafshët ku dhimbja inflamatore mund të matet në mënyrë sasiore.
19]. Linja qelizore e makrofagut të miut, RAW264.7, përdoret gjerësisht për të studiuar përgjigjet qelizore ndaj inflamacionit. Pas aktivizimit me LPS, makrofagët RAW264 aktivizojnë rrugët inflamatore dhe sekretojnë disa ndërmjetës inflamatorë, si të tillë TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS dhe IL-6.
20]. Ky studim ka vlerësuar efektet anti-nociceptive dhe anti-inflamatore të A. lappa kundër OA në modelin e kafshëve MIA, modelin e kafshëve të induktuar nga acidi acetik dhe qelizat RAW264.7 të aktivizuara nga LPS.
2. Materialet dhe metodat
2.1. Materiali bimor
Rrënja e tharë e A. lappa DC. e përdorur në eksperiment u prokurua nga Epulip Pharmaceutical Co., Ltd., (Seul, Kore). Ai u identifikua nga Prof. Donghun Lee, Departamenti i Farmakologjisë Bimore, Kol i Mjekësisë Koreane, Universiteti Gachon dhe numri i mostrës së kuponit u depozitua si 18060301.
2.2. Analiza HPLC e Ekstraktit të A. lappa
A. lappa është nxjerrë duke përdorur një aparat refluksi (ujë i distiluar, 3 orë në 100 °C). Zgjidhja e nxjerrë u filtrua dhe u kondensua duke përdorur një avullues me presion të ulët. Ekstrakti i A. lappa kishte një rendiment prej 44,69% pas tharjes në ngrirje nën -80 °C. Analiza kromatografike e A. lappa u krye me një HPLC të lidhur duke përdorur një sistem HPLC 1260 InfinityⅡ (Agilent, Pal Alto, CA, USA). Për ndarjen kromatike, kolona EclipseXDB C18 (4,6 × 250 mm, 5 µm, Agilent) u përdor në 35 °C. Një total prej 100 mg të mostrës u hollua në 10 ml metanol 50% dhe u sonikua për 10 minuta. Mostrat u filtruan me një filtër shiringë (Waters Corp., Milford, MA, USA) prej 0.45 μm. Përbërja e fazës lëvizëse ishte 0.1% acid fosforik (A) dhe acetonitril (B) dhe kolona u elua si më poshtë: 0-60 min, 0%; 60–65 min, 100%; 65–67 min, 100%; 67–72 min, 0% tretës B me një shpejtësi rrjedhjeje 1,0 mL/min. Efluenti u vëzhgua në 210 nm duke përdorur një vëllim injeksioni prej 10 μL. Analiza u krye në tre kopje.
2.3. Strehimi dhe Menaxhimi i Kafshëve
Minjtë meshkuj Sprague–Dawley (SD) të moshës 5 javësh dhe minjtë meshkuj ICR të moshës 6 javësh u blenë nga Samtako Bio Korea (Gyeonggi-do, Kore). Kafshët u mbajtën në një dhomë duke përdorur temperaturë konstante (22 ± 2 °C) dhe lagështi (55 ± 10%) dhe një cikël dritë/errësi prej 12/12 orë. Kafshët u njohën me gjendjen për më shumë se një javë përpara se të fillonte eksperimenti. Kafshët kishin një furnizim ad libitum me ushqim dhe ujë. Rregullat aktuale etike për kujdesin dhe trajtimin e kafshëve në Universitetin Gachon (GIACUC-R2019003) u ndoqën në mënyrë rigoroze në të gjitha procedurat eksperimentale të kafshëve. Studimi është projektuar si një provë e verbër nga hetuesit dhe paralele. Ne ndoqëm metodën e eutanazisë sipas udhëzimeve të Komitetit të Etikës Eksperimentale të Kafshëve.
2.4. MIA Injeksion dhe Trajtim
Minjtë u ndanë rastësisht në 4 grupe, përkatësisht sham, kontroll, indometacinë dhe A. lappa. Duke u anestezuar me përzierje 2% të izofluoranit O2, minjtë u injektuan duke përdorur 50 μL MIA (40 mg/m; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) intra-artikulare në nyjet e gjurit për të çuar në OA eksperimentale. Trajtimet u kryen si më poshtë: grupet e kontrollit dhe të shamit u mbajtën vetëm me dietën bazë AIN-93G. Vetëm, grupi i indometacinës u pajis me indometacinë (3 mg/kg) të inkorporuar në dietën AIN-93G dhe grupi A. lappa 300 mg/kg iu caktua dietës AIN-93G të plotësuar me A. lappa (300 mg/kg). Trajtimet vazhduan për 24 ditë që nga dita e induksionit të OA në masën 15-17 g për 190-210 g peshë trupore në baza ditore.
2.5. Matja e mbajtjes së peshës
Pas induksionit të OA, matja e kapacitetit mbajtës të peshës së gjymtyrëve të pasme të minjve u krye me incapacitance-MeterTester600 (IITC Life Science, Woodland Hills, CA, USA) siç ishte planifikuar. Është llogaritur shpërndarja e peshës në gjymtyrët e pasme: kapaciteti i mbajtjes së peshës (%)
