Osteoartriti (OA) është një nga sëmundjet degjenerative kronike afatgjata të kockave dhe kyçeve që prek popullsinë e moshuar mbi 65 vjeç [
1]. Në përgjithësi, pacientët me OA diagnostikohen me kërc të dëmtuar, sinovium të inflamuar dhe kondrocite të gërryera, të cilat shkaktojnë dhimbje dhe shqetësim fizik [
2Dhimbja artritike shkaktohet kryesisht nga degjenerimi i kërcit në nyje nga inflamacioni, dhe kur kërci dëmtohet seriozisht kockat mund të përplasen me njëra-tjetrën duke shkaktuar dhimbje të padurueshme dhe vështirësi fizike [
3]. Përfshirja e ndërmjetësve inflamatorë me simptoma të tilla si dhimbja, ënjtja dhe ngurtësimi i kyçit është i dokumentuar mirë. Tek pacientët me OA, citokinat inflamatore, të cilat shkaktojnë erozionin e kërcit dhe kockës subkondrale, gjenden në lëngun sinovial [
4]. Dy ankesat kryesore që pacientët me OA kanë përgjithësisht janë dhimbja dhe inflamacioni sinovial. Prandaj, qëllimet kryesore të terapive aktuale të OA janë ulja e dhimbjes dhe inflamacionit. [
5] Edhe pse trajtimet e disponueshme për osteoartritin, duke përfshirë ilaçet jo-steroide dhe steroide, kanë provuar efikasitet në lehtësimin e dhimbjes dhe inflamacionit, përdorimet afatgjata të këtyre ilaçeve kanë pasoja të rënda shëndetësore, të tilla si mosfunksionime kardiovaskulare, gastrointestinale dhe renale [
6] Kështu, duhet të zhvillohet një ilaç më efektiv me më pak efekte anësore për trajtimin e osteoartritit.
Produktet natyrale shëndetësore po bëhen gjithnjë e më popullore për shkak se janë të sigurta dhe lehtësisht të disponueshme [
7]. Ilaçet tradicionale koreane kanë provuar efikasitet kundër disa sëmundjeve inflamatore, përfshirë artritin [
8]. Aucklandia lappa DC. është e njohur për vetitë e saj medicinale, të tilla si përmirësimi i qarkullimit të qi-së për lehtësimin e dhimbjes dhe qetësimin e stomakut, dhe është përdorur tradicionalisht si një analgjezik natyral [
9]. Raportet e mëparshme sugjerojnë që A. lappa zotëron anti-inflamatorë [
10,
11], analgjezik [
12], antikancer [
13], dhe gastroprotektiv [
14] efekte. Aktivitetet e ndryshme biologjike të A. lappa shkaktohen nga përbërësit e saj kryesorë aktivë: kostunolidi, dehidrokostus laktoni, dihidrokostunolidi, kostuslaktoni, α-kostoli, saussurea laktoni dhe kostuslaktoni [
15Studimet e mëparshme pohojnë se kostunolidi tregoi veti anti-inflamatore në lipopolisakaridin (LPS), i cili induktoi makrofagët përmes rregullimit të NF-kB dhe rrugës së proteinave të shokut të nxehtësisë [
16,
17] Megjithatë, asnjë studim nuk ka hetuar aktivitetet e mundshme të A. lappa për trajtimin e OA. Hulumtimi aktual ka hetuar efektet terapeutike të A. lappa kundër OA duke përdorur MIA (monosodiumi-jodoacetat) dhe modele të brejtësve të induktuar nga acidi acetik.
Monosodiumi-jodoacetat (MIA) përdoret gjerësisht për të prodhuar shumicën e sjelljeve të dhimbjes dhe karakteristikat patofiziologjike të OA-së tek kafshët [
18,
19,
20]. Kur injektohet në nyjet e gjurit, MIA çrregullon metabolizmin e kondrociteve dhe shkakton inflamacion dhe simptoma inflamatore, të tilla si erozioni i kërcit dhe i kockave subkondrale, simptomat kryesore të OA-së [
18]. Përgjigja e dridhjes së shkaktuar me acid acetik konsiderohet gjerësisht si simulimi i dhimbjes periferike te kafshët ku dhimbja inflamatore mund të matet në mënyrë sasiore [
19]. Linja qelizore e makrofagëve të miut, RAW264.7, përdoret gjerësisht për të studiuar përgjigjet qelizore ndaj inflamacionit. Pas aktivizimit me LPS, makrofagët RAW264 aktivizojnë rrugët inflamatore dhe sekretojnë disa ndërmjetës inflamatorë, si TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS dhe IL-6 [
20]. Ky studim ka vlerësuar efektet anti-nociceptive dhe anti-inflamatore të A. lappa kundër OA në modelin shtazor MIA, modelin shtazor të induktuar nga acidi acetik dhe qelizat RAW264.7 të aktivizuara nga LPS.
2. Materialet dhe Metodat
2.1. Materiali bimor
Rrënja e tharë e A. lappa DC. e përdorur në eksperiment u sigurua nga Epulip Pharmaceutical Co., Ltd., (Seul, Kore). U identifikua nga Prof. Donghun Lee, Departamenti i Farmakologjisë Bimore, Kolonel i Mjekësisë Koreane, Universiteti Gachon, dhe numri i mostrës së kuponit u depozitua si 18060301.
2.2. Analiza HPLC e ekstraktit të A. lappa
A. lappa u nxor duke përdorur një aparat refluksi (ujë i distiluar, 3 orë në 100 °C). Tretësira e nxjerrë u filtrua dhe u kondensua duke përdorur një avullues me presion të ulët. Ekstrakti i A. lappa pati një rendiment prej 44.69% pas tharjes me ngrirje në −80 °C. Analiza kromatografike e A. lappa u krye me një HPLC të lidhur duke përdorur një sistem HPLC 1260 InfinityⅡ (Agilent, Pal Alto, CA, SHBA). Për ndarjen kromatike, u përdor kolona EclipseXDB C18 (4.6 × 250 mm, 5 µm, Agilent) në 35 °C. Një total prej 100 mg të mostrës u hollua në 10 mL metanol 50% dhe u nënshtrua ultratingujve për 10 minuta. Mostrat u filtruan me një filtër shiringe (Waters Corp., Milford, MA, SHBA) prej 0.45 μm. Përbërja e fazës mobile ishte 0.1% acid fosforik (A) dhe acetonitril (B) dhe kolona u eluua si më poshtë: 0–60 min, 0%; 60–65 min, 100%; 65–67 min, 100%; 67–72 min, 0% tretësi B me një shpejtësi rrjedhjeje prej 1.0 mL/min. Lënda e derdhur u vëzhgua në 210 nm duke përdorur një vëllim injeksioni prej 10 μL. Analiza u krye në trefish.
2.3. Strehimi dhe Menaxhimi i Kafshëve
Minjtë meshkuj Sprague-Dawley (SD) të moshës 5 javësh dhe minjtë meshkuj ICR të moshës 6 javësh u blenë nga Samtako Bio Korea (Gyeonggi-do, Kore). Kafshët u mbajtën në një dhomë duke përdorur temperaturë konstante (22 ± 2 °C) dhe lagështi (55 ± 10%) dhe një cikël dritë/errësirë prej 12/12 orësh. Kafshët u njohën me gjendjen për më shumë se një javë para se të fillonte eksperimenti. Kafshët kishin një furnizim ad libitum me ushqim dhe ujë. Rregullat aktuale etike për kujdesin dhe trajtimin e kafshëve në Universitetin Gachon (GIACUC-R2019003) u ndoqën në mënyrë strikte në të gjitha procedurat eksperimentale me kafshët. Studimi u hartua i verbër nga studiuesi dhe në një provë paralele. Ne ndoqëm metodën e eutanazisë sipas udhëzimeve të Komitetit të Etikës Eksperimentale të Kafshëve.
2.4. Injeksioni dhe Trajtimi i MIA-s
Minjtë u ndanë rastësisht në 4 grupe, përkatësisht grupe artificiale, kontrolli, indometacinë dhe A. lappa. Duke qenë të anestezuar me një përzierje 2% izofluoran O2, minjtë u injektuan duke përdorur 50 μL MIA (40 mg/m2; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, SHBA) intra-artikulare në nyjet e gjurit për të çuar në osteoartrit eksperimental. Trajtimet u kryen si më poshtë: grupet e kontrollit dhe ato artificiale u mbajtën vetëm me dietën bazë AIN-93G. Vetëm grupi i indometacinës iu dha indometacinë (3 mg/kg) e përfshirë në dietën AIN-93G dhe grupi i A. lappa 300 mg/kg iu caktua dietës AIN-93G të plotësuar me A. lappa (300 mg/kg). Trajtimet vazhduan për 24 ditë që nga dita e induksionit të osteoartritit me një normë prej 15-17 g për 190-210 g peshë trupore në baza ditore.
2.5. Matja e peshës së mbajtur
Pas induksionit të osteoartritit, matja e kapacitetit mbajtës të peshës së gjymtyrëve të pasme të minjve u krye me incapacitance-MeterTester600 (IITC Life Science, Woodland Hills, CA, SHBA) sipas planit. Shpërndarja e peshës në gjymtyrët e pasme u llogarit: kapaciteti mbajtës i peshës (%)
